通过仔细优化，例如选择合适的转染试剂和转染方法，可以在许多细胞类型中实现高水平的转染效率。针对特定细胞类型优化方案后，即可轻松完成可重现的 siRNA 筛选实验。
高效转染至关重要 小干扰 RNA (siRNA) 沉默基因表达的能力对于研究培养的哺乳动物细胞中的基因功能而言具有重要价值。通常，siRNA 实验的成败取决于 siRNA 递送。siRNA 可使用常用的转染试剂进行瞬时转染。然而，高效转染 siRNA 并不简单；因此，RNAi 在难转染的细胞类型中的实用性可能有限。为了尽可能提高外源引入的 siRNA 的有效性，需要进行转染优化实验。如果未优化关键转染参数，可能导致在细胞培养物中检测不到 RNAi 效应。这些转染参数包括培养条件、转染试剂的选择和用量、细胞暴露于转染试剂的时间以及 siRNA 的数量和质量。转染程序本身可能是一个关键因素。预铺板转染程序涉及预铺板细胞，这意味着允许细胞在转染前附着、复苏和生长 24 小时。在这里，我们证明了另一种称为反向转染 [1] 或 neofection [2] 的转染程序与传统的预铺板方法相比具有几个关键优势。反向转染涉及同时对细胞进行转染和铺板，与转染悬浮细胞所用的方法非常相似。这种方法更简单快速，因为它绕过了传统方法的几个步骤。