全 文 ：要成分是西洋参 、 黄芪 、 山楂 、 鳖甲等 。现代药理研究表明:西洋参 、 黄芪能提高机体整体的免疫功能[ 4] ;焦山楂具有抗氧化 、 增强机体细胞免疫和体液免疫的功能;鳖甲也能增强免疫功能。反复呼吸道感染与机体的免疫功能低下有密切的关系。本方通过补肺健脾 , 提高机体的免疫功能 , 为对抗外界有害因素的侵袭奠定了物质基础 。参考文献:[ 1] Mosmann T.Rapid colorimetric assay for cellular growth andsurvival:application to prolif eration and cytotoxicity assays[ J] .J Immunol Methods , 1983 , 65:55.[ 2] 王兴林 , 高良恕 , 李求是 , 等.白细胞介素 1和 2测定方法的某些改进 [ J] .中国免疫学杂志 , 1989;5:106.[ 3] 龙振洲.医学免疫学 [M] .北京:人民卫生出版社 ,第 2版.1996.44-49.[ 4] 王本祥.现代中药药理学 [ M] .天津:天津科学技术出版社 , 1997.1189.垂盆草水溶性成分的免疫活性研究张邦祝(广东新北江制药股份有限公司 , 广东清远 511515)摘要:[ 目的] 研究垂盆草水溶性成分的药理活性。[ 方法] 采用水提醇沉法将垂盆草的水提液与乙醇分别按 2∶1、 1∶1 、 1∶2 进行醇沉 , 将所得的 I、 II、 III 三组水溶性成分 , 进行正常小鼠及免疫低下小鼠的迟发型过敏 (delayed type hypersensitivity)实验 、 血清溶血素实验。[ 结果] 在细胞免疫方面 , 组分 I、 II 对免疫低下小鼠有免疫增强作用 , 而对正常小鼠无影响 , 组分 III 对正常小鼠有免疫抑制作用 , 对免疫低下小鼠无影响。[ 结论] 垂盆草 3 种水溶性成分的免疫活性和免疫调节作用与机体所处的免疫状态密切相关 , I、 II对免疫受抑状态小鼠可能起免疫调整作用。关键词:@垂盆草/免疫学;细胞免疫/药物作用;体液免疫/药物作用;迟发型过敏反应/药物作用;血清溶血素/分析;中图分类号:R285.5 文献标识码:A文章编号:1003-9783 (2001)06-0430-03垂盆草 (Sedum Sarmentosum Bunge), 又名地蜈蚣草 、佛甲草 , 是常用的一种民间草药 。性凉 、 味甘淡 、 微酸 、 无毒。主治痈 、 蜂窝组织炎 、腮腺炎 、 乳腺炎 、 蛇虫咬伤 、 烫伤 、烧伤等 , 亦可捣汁内服配合有关药物治疗肺脓疡 、 阑尾炎。随着垂盆草的药用价值被广泛的认可 , 其成分研究的报道越来越多[ 1-5] 。本实验旨在进行垂盆草水溶性成分的免疫活性研究 , 现将结果报道如下。1仪器与试剂1.1仪器800型离心沉淀机;LXJ-II 型离心沉淀机;751-GW 分光光度计;螺旋测微器;电热恒温水浴箱等。1.2试剂 刚果红 , 批号 911212;肝素钠(DNCB), 批号 990806;2 , 4 -二硝基氯苯 ,批号 890901;醋酸泼尼松片 , 批号 990808;2 , 4 , 6-三硝基氯苯 (PC), 批号 V2K4524;都氏液 (Drabkin);注射用环磷酰胺 981207;绵羊血 。1.3动物昆明种小鼠 , 雌雄不拘 , 广东新收稿日期:2001-08-22作者简介:张邦祝 (1966-), 男 , 工程师 , 从事中药工艺研究·430· 中药新药与临床药理 2001 年 11月第 12卷第 6期北江制药股份有限公司动物房提供 。2方法与结果2.1水溶性成分的提取2.2水溶性成分 I 、 II、 III 的非特异性免疫功能试验结果见表 1。表 1垂盆草 3 种水溶性成分对小鼠免疫器官胸腺 、 脾脏重量的影响组别 剂量/ (mg·g -1) N/只胸腺指数/ (mg·g-1)脾指数/ (mg·g-1)对照组 - 10 5.493±0.5830 3.711±0.9813I 50 11 6.653±0.7882＊＊＊ 4.099±1.3688II 50 10 4.873±0.9905 4.216±1.1530III 50 10 5.116±0.7971 3.992±1.2082注:与对照组比较 , ＊＊＊P结论:水溶性组分 II、 III 对小鼠免疫器官胸腺 、 脾脏重量无明显影响 , 组分 I 对小鼠免疫器官胸腺有增重作用 (P2.3对特异性细胞免疫功能的影响2.3.1 组分 III对 PC所致的接触性皮炎(PC-DTH)的影响:取昆明种小鼠随机分组 , 刮腹部之毛 , 涂 0.1%PC 无水乙醇溶液致敏。自致敏当天开始灌胃给予 25 、 50 、 100mg/kg 组分 III , 对照组给予同体积蒸馏水 ,连续 6 d , 末次给药 1 h 后 , 以 0.1%PC 橄榄油溶液 30μL 涂于小鼠右耳两面进行攻击 。24h 后测量两耳厚度 , 以两耳厚度差表示 DTH强度。见表 2。表 2垂盆草水溶性成分Ⅲ对小鼠PC-DTH 的影响 ( x±s)组别 剂量/(mg·kg -1) N/只肿胀度/ 10-2mm抑制率/ %对照组 - 12 8.45±1.50 -III 50 8 5.62±0.52＊＊＊ 33.4III 100 8 5.88±1.81＊＊＊ 30.5III 25 12 6.08±0.67＊＊＊ 45.7注:与对照组比较 , ＊＊＊P结果表明:组分 III 对 PC-DTH 的抑制作用呈剂量依赖性 , 其中 25 mg/kg III 对 PC-DTH有明显抑制作用 。2.3.2对醋酸泼尼松引起的免疫功能低下小鼠 PC-DTH 的影响:取昆明种小鼠随机分组 ,腹部刮毛 , 涂以 0.1%PC 无水乙醇溶液 0.1mL 致敏。致敏当天开始灌胃给药 , 每天 2次 。第 1 次除对照组给予同体积水外 , 其余各组均给 20 mg/kg 醋酸泼尼松;第 2 次除对照组和泼尼松组给予同体积的水外 , 其余各组分别给予 100 、 250 mg/mL 的组分 I、 II 、III。连续给药 6 d , 末次给药 1 h 后 , 以0.1%PC 橄榄油溶液 30 μL 攻击小鼠右耳正反两面 。24 h 后用螺旋测微器测量两耳厚度 ,以两耳厚度差表示 DTH 强度 。结果见表 3。3讨论以往研究对垂盆草中的有效成分垂盆草苷的药理活性已有深入的报道[ 1-5] 。为了进一步开发民间广泛使用的垂盆草 , 我们着眼其水溶性成分的研究 , 以期有所突破 。·431·中药新药与临床药理 2001年 11 月第 12卷第 6 期表 3垂盆草水溶性成分对免疫功能低下小鼠 PC-DTH 的影响 ( x±s)组别 剂量/(mg·kg-1) N/只 肿胀度/ 10-2mm 脾指数/(mg·g -1) 胸腺指数/(mg·g -1)对照组 - 9 11.2±1.30 3.325±0.68 3.658±0.82醋酸泼尼松 20 11 3.36±0.50 1.243±0.26■■■ 0.396±0.15■■■I+醋酸泼尼松 100 11 6.82±0.60＊＊＊ 1.692±0.23＊＊＊ 0.838±0.27＊＊＊250 10 6.40±0.84＊＊＊ 1.380±0.33＊＊＊ 0.887±0.19＊＊＊II+醋酸泼尼松 100 11 7.09±0.54＊＊＊ 1.763±0.43＊＊＊ 0.779±0.19＊＊＊250 10 7.10±1.29＊＊＊ 1.884±0.51＊＊＊ 0.815±0.33＊＊＊III+醋酸泼尼松 100 11 3.73±0.65 1.780±0.36＊＊＊ 0.739±0.28＊＊＊250 15 3.67±0.98 1.796±0.37＊＊＊ 0.874±0.31＊＊＊注:与醋酸泼尼松组比较 , ＊＊＊P本实验在进行垂盆草水溶性成分提取时 ,采用了直火加热浓缩和乙醇分级沉淀两种可减少垂盆草苷 (水溶性成分)析出的办法 。而且经预实验证明 , 实验分离得到的水溶性组分 I 、 II、 III 均无降酶效果 , 故我们认为 ,垂盆草苷在实验所提组分 I 、 II、 III 中含量极微 , 对实验无影响。在免疫器官增重实验中除组分 I 对胸腺重量有明显影响外 , 其余各组分对胸腺和脾脏均无明显影响 。故可认为组分 I 、 II、 III 对正常小鼠的外周免疫器官没有影响 , 不能增强机体的非特异性免疫。组分 I 对胸腺的作用有待进一步实验。在各组分的特异性细胞免疫功能测试中 ,发现组分 III 低剂量时对免疫正常鼠 DTH 有明显抑制作用 , 而对免疫低下鼠无明显影响 ,组分 I、 II 对正常免疫状态下的小鼠 DTH 无明显影响 , 对免疫受抑小鼠的细胞免疫有增强作用 , 故可认为组分 I 、 II、 III 在对不同免疫状态下的 T 细胞介导的免疫应答有显著影响 , 说明组分 I、 II 对免疫低下小鼠的胸腺依赖性免疫应答有调节作用 , 而组分 III 则对正常免疫状态小鼠的免疫力有一定的抑制作用 ,且不影响免疫器官生长。当用醋酸泼尼松处理 , 使小鼠成为免疫抑制状态时 , I、 II 组分可增强 PC-DTH , 显示其具有免疫增强作用 , 而组分 III 对免疫低下小鼠的 PC-DTH 无明显影响 。本实验说明组分 I 、 II 对正常免疫状态下的小鼠 DTH 无明显影响 , 对免疫受抑小鼠的细胞免疫方面有增强作用;而组分 III 对正常免疫状态下的小鼠 DTH 呈抑制作用 , 对免疫受抑小鼠的DTH 无影响。本实验显示垂盆草水溶性成分 I 、 II、 III主要对 T 细胞介导的特异性细胞免疫有显著的影响 , 对非特异性免疫和特异性体液免疫无明显影响 , 提示组分 I、 II 、 III 的免疫作用与机体所处的免疫状态密切相关 , I 、 II 对免疫受抑状态小鼠可能起免疫调整作用 。参考文献:[ 1] 方圣鼎, 严修琼 , 李静芳 , 等.垂盆草化学成份的研究[ J] .化学学报 , 1982 , 40(3):273.[ 2] 翟世康, 沈美玲 , 熊玉兰 , 等.垂盆草甙免疫抑制作用的研究 [ J] .中华微生物学和免疫学杂志 , 1982 , 1(3):145.[ 3] 徐强 , 赵红 , 杭秉茜.蒺藜对迟发型变态反应的抑制作用 [ J] .中国药科大学学报 , 1991 , 22 (1):12.[ 4] 吕湘林, 曹秀玲 , 张叔良 , 等.垂盆草及其制剂的分析研究 [ J] .药学学报 , 1984 , 19 (12):914.[ 5] 李静芳 , 黄秀兰 , 叶淳渠 , 等.不同产季的垂盆草及其亲缘植物中垂盆草甙的含量测定 [ J] .药学通报 , 1981 ,16 (5):12.·432· 中药新药与临床药理 2001 年 11月第 12卷第 6期
垂盆草水溶性成分的免疫活性研究<垂盆草药理研究>
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