采用3种染料分别检测50uM EdU孵育2h的HeLa细胞(40X),采用高内涵筛选平台(BD pathway 855)检测,其中Apollo®643染料检测结果为灰度值,本图片用红色渲染。
简单:无需抗原抗体反应,基于小分子化学反应的检测方法简单高效,反应仅需要几分钟;
图1 BrdU与EduU检测方法原理示意图
灵敏:无需抗体,检测染料仅BrdU抗体的1/500,很容易扩散,即便是单个增殖细胞也能准确检测;
A549细胞系孵育30分钟的细胞增殖情况
Hela细胞系孵育1小时的细胞增殖情况
3T3细胞孵育6小时的细胞增殖情况
快速:无需过夜,省却了抗原抗体反应的复杂繁琐步骤,完成整个检测周期仅需2.5小时;
10X
20X
40X图7 A549细胞系孵育2小时后的细胞增殖检测(10X,20X,40X)
准确:无需DNA变性(酸解、热解、酶解等),可有效避免变性带来的样品损伤,确保细胞核边缘清晰完整;
40X
图8 BrdU需要DNA变性后才能与抗体结合,导致BrdU、Hoechst染色弥散,边缘模糊不清;而EdU边缘清晰完整,检测更灵敏、更准确
兼容:对样品几乎无损伤,更容易与多种抗体或荧光蛋白同时标记,能够同时检测细胞其他性状特征。
EdU细胞增殖检测方法不需要剧烈的DNA变性操作,只需温和的细胞固定化和透化处理,能够较好保护细胞形态、DNA整体结构以及细胞内抗原识别位点,更适合结合其他染料或蛋白标记(如P65抗体)等进行多重标记,在细胞水平直接获取细胞多维特征信息,更适合深入开展细胞功能方面的研究。
结合P65抗体和EdU,分析药物对细胞增殖及NF-KB信号通路的影响
适用于各种动物细胞检测,对植物细胞亦适用:
EdU增殖检测方法对各种细胞系均适用,简单、灵敏、快速、准确
植物细胞的细胞壁比较厚,对植物起着保护的作用,采用抗体检测方法通常需要消化细胞壁,且容易带来一些杂质干扰,甚至破环细胞形态,导致检测的可靠性降低。EdU和Apollo®染料分子均很小,能够轻易地透过细胞壁屏障,无需消化细胞壁,无需DNA变性及抗原抗体反应,即可准确地检测植物生长,发育,分化等性状。
应用EdU检测植物细胞生长分化(Kotogány E, et al. Plant Methods. 2010)