称取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸馏水中,用HCl调节溶液的pH值至7.4,最后加蒸馏水定容至1L即可。在15lbf/in2(1034×105Pa)高压下蒸气灭菌(至少20分钟),保存存于室温或4℃冰箱中。
需要注意的是,通常所说的浓度0.01M 指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度,而非Na 离子或K 离子的浓度,Na 离子和K 离子只是用来调节渗透压的。如果是用于免疫组化的话,则需要在配置的时候分别加入100 u/ml青霉素和链霉素之后再调PH、定容、灭菌消毒。
NaCl 8.0g ; KCl 0.2g ; Na2HPO4 1.44g ; KH2PO4 0.24g ;加蒸馏水 至 1000ml,调节pH 到 7.4(用Na2HPO4或KH2PO4调节) 。
用于免疫反应时可加入 0.1%叠氮钠(0.1g/100ml PBS);当试剂中含有辣根过氧化物酶时,严禁使用叠氮钠,可改用0.01%柳硫汞。
PBS缓冲液配方
PH 7.6 7.4 7.2 7.0H2O 1000 1000 1000 1000NaCl 8.5 8.5 8.5 8.5Na2HPO4 2.2 2.2 2.2 2.2NaH2PO4 0.1 0.2 0.3 0.4
根据经验来看,新鲜配置的PBS搅匀后其PH值约在7.2-7.4之间,可是在温度的影响下,尤其在夏天,其电离常数发生了改变,在经过昼夜的时间后,PH值会明显改变(我亲自测过偏酸)。所以做实验的同学可要注意了,PH值可能会影响实验结果,甚至可能导致阴性。所以务必记得这个时候和天气,要加强实验条件控制问题。每次使用前最好用试纸测一下过夜了的PBS,如果发生偏酸或偏碱,注意重新换新液。
PBS缓冲液称取NaCl 8g,KCl 0.2g,Na2HPO4?12H2O 3.63g, KH2PO4 0.24g,溶于900ml双蒸水中,用盐酸调pH值至7.4,加水定容至1L,常温保存备用。
PBST缓冲液取300μl Tween-20 加入PBS 100ml中,混匀后即刻使用。现用现配。
如果是把所有固体加大十倍,配置为浓缩液,工作时候十倍稀释,那么,在刚配好浓缩液时,PH在6.5左右,明显偏酸。不能用盐酸调。虽然可以用氢氧-化钠颗粒调,但是有更方便的方法。
十倍稀释以后,PH自动升高到所需要的值。不需要其它任何处理。这个可以先取少量试一试,配好之后再测一次~
PH8.0的PBS配方详细
1. NaCl 137mmol/L,KCl 2.7mmol/L,Na2HPO4 4.3mmol/L, KH2PO4 1.4mmol/L
2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水,充分搅拌溶解。
3. 滴加浓盐酸将pH值调节至8.0,然后加入去离子水将溶液定容至1 L。
4. 高温高压灭菌后,室温保存。
注意:上述PBS Buffer中无二价阳离子,如需要,可在配方中补充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。
0.05mol/L PBS(磷酸缓冲液Phosphate Buffer Solution,PBS)的配制:
甲液:0.05mol/L Na2HPO4溶液 :称取磷酸氢二钠9.465g 7.099g,加蒸 馏水至1000ml ;乙液:0.05mol/L KH2P04溶液: 称取磷酸二氢钾, 9.07g 6.803g,加蒸馏水至1000m1。将甲乙液分装在棕色瓶内,于4℃冰箱中保存,用时甲、乙两液各按不同比例混合,即可得所需pH的缓冲液,见下表:
pH 甲液ml 乙液mI5.29 2.5 97.55.59 5.0 95.05.91 10.0 90.06.24 20.0 80.06.47 30.0 70.06.64 40.0 60.06.81 50.0 50.06.98 60.0 40.07.17 70.0 30.07.38 80.0 20.07.73 90.0 10.08.04 95.0 5.0
你要配制pH=6.8的PBS,可用甲、乙液各50ml混合即可。